相关文章

PAGE胶电泳DNA条带回收:常规凝胶回收试剂盒一样行!

来源网址:http://www.hj109.net/

关键词:PAGE胶电泳,丙烯酰胺,DNA回收

    用常规的凝胶回收盒(Gel Extraction Kit)来回收琼脂糖凝胶电泳里的DNA条带可谓最简便易行的实验室操作之一。只要割胶,加入溶胶Buffer保温溶胶,上柱离心,清洗一次,最后洗脱就可以了。不过如果实验偶尔需要跑聚丙烯酰胺PAGE胶,回收DNA可就麻烦多了。电洗脱?要多麻烦就有多麻烦,回收率还低----PAGE上样量本来就不能多加,否则分辨率会降低,量少再加上回收率低做起来就更加不划算。本来好几年前生物通就介绍过一个以色列公司的Geba小管子可以专门对付PAGE胶电泳,用的是电洗脱的原理,能令操作容易得率提高,不过还是需要耗时甚久。加上这以色列公司已经几经转手,负责销售此产品的基因有限公司的员工显然也不太熟悉这可爱的小东西,每每出现一问三不知的情况,使得购买相当不方便。

    实验人员的智慧是无穷的。一众Qiagen的拥趸们在“享受”了QiaQuick Gel Extraction Kit的畅快使用感后,等来等去又等不到厂家推出PAGE胶专用的试剂盒,于是开始自行摸索用这个琼脂糖凝胶回收试剂盒来回收PAGE胶里的DNA条带,并将成功的方法反馈给Qiagen,于是Qiagen公司发布了User-Developed Protocol,虽然Qiagen说并未经最严格的彻底验证和优化,不过既然声誉卓著的厂家肯公开发布,毫无疑问已经证实是可行的了。生物通小编在这里特别推荐给大家,从此,你可以用常规的胶回收试剂盒来对付PAGE胶里的DNA条带,而不需另外购买一个Kit或者苦恼其他复杂的方法啦。

自配溶液:diffusion buffer: 0.5 M ammonium acetate; 10 mM magnesium acetate; 1 mM EDTA, pH 8.0; 0.1% SDS.

操作流程:

1. 割胶,越小越好。

2. 溶胶:加入1-2倍体积的自配diffusion buffer(100ul-200ul vs. 100mg PAGE胶条),50°保温30分钟。

3. 离心取上清,小心除去未溶胶碎片,最好能过一个带过滤膜的小柱或者过滤针头。

4. 估计上清的体积,加入3倍体积的溶胶Buffer(试剂盒提供的)混合,确认溶液pH指示剂依然显黄色,如果变色为橙或紫色,可补加10ul 3M醋酸钠(pH5.0)至指示剂颜色转黄(pH

5. 离心过柱,PE清洗一次,弃去废液后再多离心一次。最后加洗脱液于滤柱的膜上,停留1分钟后离心得到要回收DNA片段的溶液。

    相比琼脂糖凝胶回收的步骤,这个方法其实只是前面多了一步,用自配的diffusion buffer溶胶,时间长一些,再混合试剂盒提供的Buffer,后面的步骤基本一致了。这样,再不用为PAGE凝胶回收而苦恼,也不需要另外专门购买其他的试剂盒。真方便。鉴于各品牌的凝胶回收试剂盒原理相似,这个方法其他品牌估计也是能通用的。怎么样,你也试试吧!

相关报道: